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Saint Jean-Baptiste dans le désert représente un épisode évoqué dans Évangile selon Matthieu 3,4 : « Et lui, Jean, avait un vêtement de poil de chameau, et autour de ses reins une ceinture de peau, et il se nourrissait de sauterelles et de miel sauvage. »
Jean le Baptiste est souvent représenté aux côtés d'un agneau. L'animal symbolise le sacrifice du saint, en tant que victime innocente de la méchanceté humaine, mais il est également possible que le saint pointe son doigt en direction de Jésus-Christ, représenté sous la forme de l'agneau pascal (Jean 1:29-36[3]). Le tableau de Bosch diffère des autres représentations de saint Jean-Baptiste par les objets fantastiques qu'il représente.
À l'origine ce tableau constituait avec Saint Jean l'Évangéliste à Patmos, qui est exposé à Berlin, les deux panneaux latéraux d'un retable. Le retable en question est, peut-être, celui qui a été commandé à Jérôme Bosch pour la cathédrale Saint Jean de Bois-le-Duc.
Le tableau est acquis par le collectionneur espagnol Lázaro Galdiano en 1913. Il est actuellement exposé au Museo Lázaro Galdiano, à Madrid